选择底盘与目标基因,即可获得带 PAM、活性评分与脱靶风险的 sgRNA 候选,以及左右同源臂。
从底盘与目标位点到完整的 CRISPR 编辑方案,五个阶段标注本条目中的每一步。
从涵盖细菌、酵母与丝状真菌的 30 株底盘库中选择。
按名称或关键词查找基因、列出重复元件,或粘贴裸 DNA 序列。
扫描 PAM、评分靶向活性,并按候选的脱靶风险排序。
构建左右同源臂,并做拷贝数与 PAM 破坏检查。
复制 sgRNA 订购格式并下载同源臂 FASTA。
细菌、酵母与丝状真菌,每株带菌株特异的基因组注释。
按 Azimuth 评分排序,并标记 MM0/MM1/MM2+ 脱靶命中。
对同源臂内的 PAM 位点做同义突变,防止 Cas9 二次切割。
同源臂的默认与推荐长度按底盘逐一定制。
选择底盘、填写目标基因(或粘贴序列),然后设计。
分阶段观察设计进展。
排序后的 sgRNA 候选与左右同源臂,附拷贝数与 PAM 破坏说明。
每次保存的运行都会成为一个可复现条目,带可在方法学中引用的 Entry ID。交接至表达盒设计器会预填 guide 序列。
先运行设计,再在此保存。